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UV1901紫外分光光度計測葡萄糖的方法

測定葡萄糖是臨床化學(xué)中的重要檢測項目，鉬類雜多酸是光度分析中的重要顯色劑，主要用來測定硅、磷等物質(zhì)。葡萄糖在適當條件下能有顯色反應(yīng)，其吸光度與葡萄糖濃度呈線性關(guān)系.

實驗儀器與試劑

UV1901紫外分光光度計（上海奧析科學(xué)儀器有限公司）

UV1901紫外分光光度計采用濱松無臭氧環(huán)保型氘燈，普通長壽命氘燈會有臭氧產(chǎn)生，長期吸入對身體有害，無臭氧長壽命氘燈就可以有效避免。儀器還采用德國歐士朗鎢燈，美國派來芝檢測器，雙光束光學(xué)系統(tǒng)，加厚光學(xué)底板，更能保證儀器的穩(wěn)定性。操作界面和操作系統(tǒng)都是簡便快捷版的，減少了檢測時間的同時，增加準確性.吸光度可以到小數(shù)點后四位。可選配多種附件，自動四聯(lián)池，七聯(lián)池，恒溫裝置，透過率固體架，反射率固體架等。

UV1901紫外分光光度計的顯示方式：6英寸 320×240 點陣帶背光數(shù)字 LCD

光源燈：預(yù)調(diào)日本濱松無臭氧環(huán)保型氘燈 歐司朗長壽命鹵鎢燈

光學(xué)系統(tǒng)：精密雙光束光學(xué)系統(tǒng)

接口：RS232C串行通訊口用于接配軟件，并行打印口用于接配打印機

光譜掃描功能：主機及軟件支持

電源電壓：100V～240V   50/60±1Hz

儀器尺寸：650×450×220（mm）

凈重：25Kg

特點

UV1901紫外分光光度計的光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計和電路控制系統(tǒng)設(shè)計十分嚴謹,元器件的選用控制嚴格,具有高標準的準確度、重復(fù)性、低噪聲和低雜散光指標，線性范圍和穩(wěn)定性指標也十分出色。有1nm和2nm帶寬兩種配置適合不同用戶選擇，大屏幕LCD顯示，具高測量精度和穩(wěn)定性，是一款高品質(zhì)的儀器。

UV1901紫外分光光度計使用日本濱松無臭氧環(huán)保型氘燈，使用壽命達到2000小時，光輸出可保持穩(wěn)定直至其使用壽命，替換極為方便。

UV1901紫外分光光度計提供2種操作模式：主機測量模式或軟件控制測量模式。

內(nèi)建的SCM技術(shù)和定性定量分析軟件能實現(xiàn)數(shù)據(jù)采集與處理、光譜測量、動力學(xué)測量、定量分析、DNA測定和光譜掃描等擴展功能。菜單下拉式分析軟件易于操作。

UV1901紫外分光光度計具有開放式的樣品室，可選配反射樣品架、固體樣品架、恒溫水浴和自動進樣器等適合于不同的應(yīng)用。

單機掃描曲線可以存儲9條，工作曲線可以存儲9條。聯(lián)機模式儲存數(shù)量不限。

主要技術(shù)指標  

分析軟件

舒適的操作感受和豐富的分析功能--UVCON系列定性定量數(shù)據(jù)處理分析軟件

UVCON系列定性定量數(shù)據(jù)處理分析軟件是為上海奧析科學(xué)儀器有限公司的1700、1800和1900三個系列儀器的分析軟件。通過通訊電纜將儀器主機的RS232C通訊口與電腦上的串行通訊口或USB口聯(lián)接，利用軟件對主機的運行進行控制，并對主機采集到的數(shù)據(jù)進行分析、處理或輸出，幫助完成從常規(guī)質(zhì)控到環(huán)保、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)衛(wèi)生、材料等諸多領(lǐng)域的分析研究。

●光譜測量

  峰谷檢測                             掃描參數(shù)設(shè)定                   掃描圖譜

●動力學(xué)測量

動力學(xué)測量可測定從1秒-10小時的透射比或吸光度的時間變化，記錄間隔從0.1-60秒，可以觀察快速的反應(yīng)和變化。在數(shù)據(jù)處理功能中有峰谷檢測和導(dǎo)數(shù)運算。

磷鉬黃（鈉鹽）溶液：濃度為0.10mol/l（PH 1,4）鹽酸-鄰笨二甲酸氫鉀緩沖液：濃度為0.4mol/l（PH3.0），使用前將這兩種溶液1:1混合，制成即用的磷鉬黃混合顯色溶液；葡萄糖標準溶液：1.00mol/l。所用試劑均為二級以上，實驗用水為二次蒸餾水。

測量方法

于一系列25ml容量瓶中，加入一定量的葡萄糖溶液，加4.0ml磷鉬黃混合顯色溶液，再加少量蒸餾水，將容量瓶放入沸水浴中加熱60min，取出流水冷卻，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。靜置片刻后，以試劑為空白，于波長690nm處測定其吸光值。

反應(yīng)溫度與時間

在室溫下，磷鉬黃與葡萄糖混合，即使放置1-2D，也未見發(fā)生反應(yīng)。

然而，當置于沸水浴中時，反應(yīng)速度將大大提高，60。min后，顯色達

zui大。

圖1

a—葡萄糖4×10-5molL,加入混合顯色溶液4.0mL,25mL體積;b—葡萄

糖2×10-3molL,其它同a

2.1.2 反應(yīng)酸度的確定 實驗表明,磷鉬黃與葡

萄糖在pH2～4之間反應(yīng)比較適宜,pH值太小,顯色不*,pH值過大,磷鉬黃將分解。

2.1.3 

磷鉬黃用量選擇 實驗了一系列不同濃度磷鉬黃的用量,對葡萄糖在2.0×10-3molL、0.1molL的磷鉬黃用量為1.8mL時,吸光度已達zui大值。本實驗選定為2.0mL。

2.1.4 緩沖液及其用量選擇 實驗了乙酸2乙酸鈉,磷酸鹽,檸檬酸2NaOH和HCl2KHC8H4O4緩沖溶液。結(jié)果表明,用HCl2KHC8H4O4(pH3.0)緩沖

溶液時,顯色比較快。而另外3種緩沖溶液顯色速度慢,所以選擇了HCl2KHC8H4O4緩沖溶液。其用量為2mL左右時,顯色穩(wěn)定。

2.2 測量吸光度的*波長的選擇

通過對顯色溶液的波長

掃描實驗,波長在690nm附近吸收zui大,選定690nm處為吸光度測定波長。

2.3 共存物質(zhì)的影響及消除

對8×10-5molL的葡萄糖試液,50倍的SO42-,NO3-,Cl-,F-,醋酸根,檸檬酸根,酒石酸

根,EDTA不影響測定。而SO32-,S2-,NO22-及Fe2-等倍時就嚴重干擾測定。維生素C嚴重干擾,但維生素C在室溫時,可與磷鉬黃*反應(yīng),對于維生素C含量不太高時(等量葡萄糖濃度或以下),能利用反應(yīng)速度的差異,差減扣除其干擾。

2.4 葡萄糖與磷鉬黃反應(yīng)的量的關(guān)系

采用等摩爾法測定了葡萄糖與磷鉬黃反應(yīng)量的比例關(guān)系,結(jié)果見圖2。從圖可見,當摩爾比為1∶1時,吸光度zui大。從文獻[4]報道的鉬藍顯色反應(yīng)機理看,本文研究的顯色反應(yīng),也可能為氧化還原過程。葡萄糖濃度+磷鉬黃濃度=1×10-3molL

2.5 

工作曲線的制作

于一系列25mL的容量瓶中,分別加入1.00molL的葡萄糖0,2,5,10,20,30,50ΛL,再加磷鉬黃混合顯色溶液4.0mL,添加大約5mL二次蒸餾水,搖勻。沸水浴中加熱60min,取出流水冷卻,稀釋至刻度。1cm比色皿,690nm處測定吸光值A。得到回歸方程的實驗數(shù)據(jù)為:y(吸光

度)=218197x(molL)+0.0018,相關(guān)系數(shù)r=0.9988

2.6 葡萄糖注射液樣品的測定

A:葡萄糖注射液100mL瓶裝,含葡萄糖10g。

取5.0mL樣品,稀釋至50mL,搖勻,分析中每份取此溶液200ΛL。

B:葡萄糖氯化鈉注射液250mL瓶裝,含葡萄糖12.5g。取5.0mL樣品,稀釋至50mL,搖勻,分析中每份取此溶液500ΛL。按分析方法進行操作,得到的結(jié)果見表1